Corantes Fluorescentes para Marcação de Vesículas Extracelulares
O Vesi-Dye LMB é uma linha de sondas fluorescentes lipofílicas desenvolvida para a marcação estável de vesículas extracelulares, exossomos, lipossomas, vírus envelopados, LNPs e outras partículas que apresentam bicamada lipídica.
Esses corantes pertencem à família dos oligoeletrólitos conjugados, também conhecidos como COEs, e atuam por intercalação em membranas lipídicas. Após a inserção na bicamada, os Vesi-Dyes tornam-se fluorescentes, permitindo a detecção e o rastreamento de partículas ligadas à membrana em diferentes plataformas analíticas.Por serem solúveis em água, fluorogênicos e estáveis, os corantes Vesi-Dye LMB oferecem sinal fluorescente brilhante, baixo ruído de fundo e maior confiabilidade em análises de vesículas extracelulares e nanopartículas biológicas.
Opções de Vesi-Dye LMB por excitação e emissão
A linha Vesi-Dye LMB está disponível em diferentes faixas espectrais, permitindo a escolha do corante mais adequado conforme o laser, o filtro e o detector disponível no equipamento utilizado pelo laboratório.
| Espec | Vesi-Dye LMB-430 | Vesi-Dye LMB-490 | Vesi-Dye LMB-520 | Vesi-Dye LMB-600 | Vesi-Dye LMB-800 |
|---|---|---|---|---|---|
| Excitação | 355 nm | 405 nm | 488 nm | 488 nm ou 525 nm | 638 nm |
| Emissão | 430 nm | 490 nm | 525 nm | 600 nm | 800 nm |
| Solubilidade | Solúvel em água | Solúvel em água | Solúvel em água | Solúvel em água | Solúvel em água |
| Estabilidade | 24 horas após incubação | 24 horas após incubação | 24 horas após incubação | 24 horas após incubação | 24 horas após incubação |
| Formato | 100 aplicações | 100 aplicações | 100 aplicações | 100 aplicações | 100 aplicações |
As opções disponíveis incluem:
Vesi-Dye LMB-430
Excitação em 355 nm e emissão em 430 nm.
Vesi-Dye LMB-490
Excitação em 405 nm e emissão em 490 nm.
Vesi-Dye LMB-520
Excitação em 488 nm e emissão em 525 nm.
Vesi-Dye LMB-600
Excitação em 488 nm ou 525 nm e emissão em 600 nm.
Vesi-Dye LMB-800
Excitação em 638 nm e emissão em 800 nm.
Essa variedade permite adequar o corante a fluxos de trabalho com citometria de fluxo, F-NTA, microscopia de fluorescência e outras técnicas baseadas em emissão fluorescente.
Espectros de fluorescência dos Vesi-Dyes LMB
Os espectros de fluorescência auxiliam na seleção do Vesi-Dye LMB mais adequado para cada aplicação, considerando as configurações ópticas do instrumento e a compatibilidade com outros marcadores do painel experimental.
Espectro do Vesi-Dye LMB-430
Espectro do Vesi-Dye LMB-490
Espectro do Vesi-Dye LMB-520
Espectro do Vesi-Dye LMB-600
Espectro do Vesi-Dye LMB-800
A seleção correta da faixa espectral é importante para reduzir sobreposição de sinais, otimizar a sensibilidade da detecção e melhorar a qualidade dos dados obtidos em análises de partículas em escala nanométrica.
Marcação específica de bicamadas lipídicas
O Vesi-Dye LMB foi desenvolvido para marcar estruturas que apresentam bicamada lipídica, como vesículas extracelulares, exossomos, lipossomas, LNPs, vírus envelopados e mitocôndrias.
Essa característica ajuda a diferenciar partículas membranosas de estruturas sem bicamada lipídica, como capsídeos, agregados proteicos, partículas minerais e nanobolhas. Em análises de nanopartículas, essa especificidade é importante para reduzir interferências e melhorar a interpretação dos eventos detectados.
Além disso, os Vesi-Dyes foram projetados para não gerar micelas ou agregados durante as etapas de solubilização e incubação, contribuindo para amostras mais limpas e menor risco de contaminação por eventos não relacionados à amostra.
Benefícios do Vesi-Dye LMB
Os corantes Vesi-Dye LMB oferecem uma solução prática para laboratórios que precisam marcar e rastrear vesículas extracelulares, exossomos e outras nanopartículas lipídicas com maior estabilidade e menor ruído de fundo.
Entre os principais benefícios estão:
- Marcação específica de bicamadas lipídicas
- Sondas solúveis em água
- Sinal fluorescente brilhante e estável
- Baixo ruído de fundo por fluorogenicidade
- Sem transferência de corante entre membranas
- Baixa formação de micelas e agregados
- Compatibilidade com múltiplas faixas espectrais
- Aplicação em EVs, lipossomas, vírus envelopados e LNPs
Análise de nanopartículas por citometria de fluxo
Em citometria de fluxo, a detecção de nanopartículas por espalhamento pode ser limitada, pois partículas pequenas muitas vezes geram sinal insuficiente para se destacar do ruído de fundo.
Esse desafio afeta a análise de vesículas extracelulares, exossomos, vírus, vetores virais, lipossomas, LNPs e outros nanocarreadores. A marcação fluorescente permite aumentar a capacidade de detecção, deslocando a análise do sinal de espalhamento para um sinal fluorescente mais específico.
O Vesi-Dye LMB contribui para essa estratégia ao marcar estruturas com bicamada lipídica, oferecendo sinal fluorescente estável e baixa formação de contaminantes em nanoescala, como micelas e agregados.
O exemplo com Vesi-Dye LMB-490 demonstra a diferença entre o controle de corante e amostras marcadas, evidenciando o aumento de eventos fluorescentes associados a vesículas extracelulares e lipossomas após a marcação.
Aplicação em citometria de fluxo com Vesi-Dye 600
A linha Vesi-Dye LMB permite trabalhar em diferentes canais de excitação e emissão, facilitando a adaptação do corante ao painel experimental e à configuração do instrumento.
O gráfico demonstra a aplicação de um corante Vesi-Dye 600 em análise por citometria de fluxo, evidenciando aumento de eventos fluorescentes em exossomos marcados em comparação aos controles. Essa abordagem reforça o uso de sondas fluorescentes lipofílicas para detecção de partículas com bicamada lipídica, como vesículas extracelulares, exossomos e outros nanomateriais biológicos.
Controle de impurezas em F-NTA e F-MRPS
Técnicas como Fluorescence Nanoparticle Tracking Analysis, ou F-NTA, e Fluorescence Microfluidics Resistive Pulse Sensing, ou F-MRPS, permitem complementar a detecção física de partículas com informações fluorescentes.
Em análises de nanopartículas, eventos não relacionados à amostra, como bolhas, impurezas minerais ou partículas sem membrana lipídica, podem ser contabilizados em relatórios de tamanho e concentração. Isso pode comprometer a precisão dos resultados.
Ao marcar seletivamente estruturas com bicamada lipídica, o Vesi-Dye LMB ajuda a diferenciar eventos fluorescentes positivos de partículas não específicas, permitindo uma análise mais direcionada de vesículas extracelulares, lipossomas, vírus envelopados e nanopartículas lipídicas.
Análise F-NTA de lipossomas marcados com Vesi-Dye LMB-490
O Vesi-Dye LMB-490 também pode ser utilizado em análises por F-NTA, permitindo avaliar partículas marcadas por fluorescência e complementar os dados de distribuição de tamanho e concentração.
A análise de lipossomas marcados com Vesi-Dye LMB-490 foi adquirida em um ZetaView, utilizando laser de 405 nm e detector de 500 nm, demonstrando a aplicação do corante em plataformas de rastreamento de nanopartículas com detecção fluorescente.
Esse tipo de abordagem auxilia na diferenciação de partículas lipídicas em relação a eventos não específicos, contribuindo para análises mais direcionadas de vesículas extracelulares, exossomos, lipossomas e outras partículas com bicamada lipídica.
Ensaios de uptake celular com Vesi-Dye LMB
A marcação fluorescente é uma das estratégias mais utilizadas para acompanhar a interação e a internalização de vesículas extracelulares, vírus e nanopartículas por células-alvo.
Os Vesi-Dyes LMB combinam especificidade, brilho e estabilidade, características importantes para estudos de uptake celular. As partículas marcadas podem ser avaliadas por microscopia de fluorescência, citometria de fluxo, espectroscopia e outras técnicas baseadas em fluorescência.
Para ensaios funcionais, recomenda-se remover o corante livre após a marcação, reduzindo interferências e melhorando a relação entre o sinal detectado e as partículas realmente associadas à membrana.
Remoção de Vesi-Dye LMB não ligado após a marcação
Após a incubação da amostra com Vesi-Dye LMB, a remoção do corante livre é uma etapa importante para reduzir ruído de fundo e evitar interferências em análises posteriores.
Para essa etapa de clean-up, o fabricante recomenda o uso de colunas Vesi-SEC Micro, que permitem remover rapidamente o Vesi-Dye LMB não ligado por cromatografia de exclusão por tamanho em formato de centrifugação.
Essa combinação permite obter amostras marcadas mais limpas, estáveis e adequadas para citometria de fluxo, F-NTA, microscopia e ensaios funcionais.
Aplicações do Vesi-Dye LMB
O Vesi-Dye LMB pode ser aplicado em diferentes fluxos de trabalho envolvendo partículas ligadas à membrana.
Aplicações principais:
- Marcação fluorescente de vesículas extracelulares
- Marcação de exossomos
- Marcação de lipossomas
- Marcação de LNPs
- Marcação de vírus envelopados
- Análise por citometria de fluxo
- Análise por F-NTA
- Análise por F-MRPS
- Microscopia de fluorescência
- Ensaios de uptake celular
- Controle de eventos não específicos em nanopartículas
- Estudos com partículas ligadas à membrana
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Perguntas frequentes sobre Vesi-Dye LMB
O que é o Vesi-Dye LMB?
O Vesi-Dye LMB é uma linha de sondas fluorescentes lipofílicas para marcação estável de membranas lipídicas em vesículas extracelulares, exossomos, lipossomas, vírus envelopados e outras partículas com bicamada lipídica.
Quais versões do Vesi-Dye LMB estão disponíveis?
A linha inclui Vesi-Dye LMB-430, LMB-490, LMB-520, LMB-600 e LMB-800, com diferentes faixas de excitação e emissão.
O Vesi-Dye LMB é solúvel em água?
Sim. Os Vesi-Dyes LMB são solúveis em água, facilitando a reconstituição e o uso em meios aquosos.
O Vesi-Dye LMB pode ser usado em citometria de fluxo?
Sim. O Vesi-Dye LMB pode ser utilizado para marcação fluorescente de nanopartículas e análise por citometria de fluxo, especialmente quando o sinal de espalhamento não é suficiente.
O Vesi-Dye LMB pode ser usado em F-NTA?
Sim. O Vesi-Dye LMB pode ser aplicado em análises por F-NTA para complementar a detecção de partículas por fluorescência.
O Vesi-Dye LMB forma micelas ou agregados?
O posicionamento do fabricante indica que o Vesi-Dye LMB não gera micelas ou agregados durante as etapas de solubilização e incubação.
Como remover o corante livre após a marcação?
O fabricante recomenda o uso de colunas Vesi-SEC Micro para remover Vesi-Dye LMB não ligado após a marcação de EVs ou nanopartículas.
Qual tampão usar para reconstituir Vesi-Dye LMB?
O fabricante recomenda água purificada ou tampões aquosos em força fisiológica, como PBS ou TAE, sem aditivos como albumina ou surfactantes.
Quanto tempo deve durar a incubação?
O material recomenda incubação entre 30 minutos e 1 hora em temperatura ambiente ou 37°C. Para períodos mais longos, é recomendada incubação a 4°C.
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